氣相液氮罐 短期儲存胚胎的可行性研究

【摘要】目的探討用氣相液氮運(yùn)輸罐運(yùn)輸小鼠胚胎和短時間保存小鼠胚胎的可行性。方法實(shí)驗(yàn)使用4個小鼠品系（c57Bu6、B6D2、DBA／2、B10A），通過體外授精的方法得到2．細(xì)胞胚胎，用玻璃化冷凍法冷凍胚胎并儲存于液相液氮罐，然后轉(zhuǎn)移至氣相液氮運(yùn)輸罐內(nèi)放置14 d再轉(zhuǎn)入液相液氮罐，zui后進(jìn)行復(fù)蘇移植。

結(jié)果4個品系的冷凍胚胎的復(fù)蘇率分別為69．7％、77．27％、77．59％、72．64％，對照組的相應(yīng)復(fù)蘇率為97％、84．38％、75％、71．43％，差異均不明顯（p<0．05）．4個品系胚胎移植后，除B10A這個品系的出生率差異顯著外（尸0．05）。結(jié)論在氣相液氮運(yùn)輸罐短時間內(nèi)儲存胚胎或通過氣相液氮運(yùn)輸罐進(jìn)行胚胎運(yùn)輸是可行的。
[關(guān)鍵詞】小鼠胚胎；氣相液氮運(yùn)輸罐；低溫保存

哺乳動物的胚胎超低溫保存zui早在小鼠獲得成功，1972年英國學(xué)者Whittingham首先成功地冷凍保存了小鼠胚胎，發(fā)明了胚胎的慢速冷凍保存方、法【1】。1985年RaU等【z】成功保存小鼠8細(xì)胞胚胎。此后，研究人員主要從事低毒性的玻璃化溶液、簡化冷凍程序和除去毒性抗凍劑等方面對玻璃化冷凍法加以改進(jìn)【}s1。

傳統(tǒng)的長期活體保種，不但需要大量空間、人力、物力，還可能發(fā)生遺傳漂變和遺傳污染【61。許多實(shí)驗(yàn)室都通過冷凍保存小鼠胚胎的方法建立冷凍胚胎庫，因此引進(jìn)新的小鼠品系越來越多地通過引進(jìn)小鼠胚胎的形式進(jìn)行。

但傳統(tǒng)的液相液氮罐在運(yùn)輸時有不少缺點(diǎn)，罐體體積大、分量重，溢出液氮容易凍傷人等。而新型的氣相液氮運(yùn)輸罐是靠罐壁內(nèi)層的液氮層吸附大量液氮，并向外排出液氮蒸汽來使罐內(nèi)溫度達(dá)到一188℃至一194℃保存胚胎。它有著體積小分量輕的優(yōu)點(diǎn)，方便運(yùn)輸，還可以降低胚胎之間交義污染。

本文通過小鼠冷凍2一細(xì)胞胚胎在氣相液氮運(yùn)輸罐保存14 d后，進(jìn)行復(fù)蘇和移植，并和保存在傳統(tǒng)液相液氮罐胚胎的復(fù)蘇率和出生率相比較，來探討用氣相液氮運(yùn)輸罐運(yùn)輸或短期保存小鼠胚胎的可行性。