試驗(yàn)表明,將攻擊菌復(fù)蘇、傳代(3~9代)、分裝并保存在液氮中,攻擊菌仍然保持原有的生物學(xué)特性,符合《中華人民共和國(guó)藥典》〔2〕中攻擊菌的LD50為100~1000 /MLD的要求,可用于無細(xì)胞百日咳效力檢定。且有較好的穩(wěn)定性,該法制備的攻擊菌用于檢定可減少人力、物力并節(jié)省時(shí)間,降低生產(chǎn)成本,提高工作效率,并能使每批的檢定結(jié)果不因攻擊菌的變化而受影響。因同批制備的攻擊菌支間差異不顯著,從而更能準(zhǔn)確地反映制品的真實(shí)效價(jià)結(jié)果。
在攻擊菌制備過程中,通過多次反復(fù)試驗(yàn)取得了一些經(jīng)驗(yàn),現(xiàn)表述如下:
①在制備過程中攻擊菌的濃度測(cè)定非常重要,制備過程嚴(yán)格控制不受污染,而且必須純菌檢查合格;
②要注意在放入液氮前,一定要先緩凍,慢速冷卻會(huì)有充分的時(shí)間使細(xì)胞內(nèi)的水分向外滲出達(dá)到平衡,快速冷卻沒有充分的時(shí)間使細(xì)胞內(nèi)的水分向外滲出、脫水,加速細(xì)胞內(nèi)冰晶增大,使細(xì)胞處于損傷狀態(tài)或潛在的損傷狀態(tài); 液氮罐價(jià)格
③快速加溫融化不會(huì)在解凍過程中其冰晶損傷細(xì)胞〔3〕,因此解凍時(shí)一般在3分鐘左右為宜。在生產(chǎn)實(shí)踐中需不斷積累經(jīng)驗(yàn)、掌握操作技能,為提高制品質(zhì)量,在攻擊菌的應(yīng)用上尚有待進(jìn)一步改進(jìn)。