放入液氮罐中的組織復(fù)蘇的步驟如下:
將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出,注意迅速且要保護(hù)好自己,防止低溫傷害和可能的爆炸風(fēng)險(xiǎn)。一種推薦的操作方法是在地面或是桌面上鋪兩層干凈吸水紙,將取出的凍存管放到吸水紙上,放平后液氮會快速從管縫隙中滲漏出來。
將凍存管放入37°C的水浴中進(jìn)行融化,輕柔晃動(dòng)以加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,這個(gè)過程應(yīng)控制在1分鐘內(nèi)完成。
用70%乙醇擦拭凍存管外部后,轉(zhuǎn)移到無菌操作臺中。在打開瓶蓋前,用酒精燈火焰對瓶口進(jìn)行消毒。
將預(yù)加熱的新鮮完全培養(yǎng)基滴入凍存管中,然后用移液槍吸取瓶中液體至離心管中,加入適量濃度和體積的完全培養(yǎng)基,輕柔混合均勻。
進(jìn)行細(xì)胞懸浮液的離心,速度和時(shí)間因細(xì)胞類型而異。離心后棄掉上清,加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,應(yīng)盡量維持高密度以提高細(xì)胞存活率。
請注意,整個(gè)操作過程中必須保持無菌,以避免細(xì)胞污染。同時(shí),所有步驟都應(yīng)在合適的溫度和環(huán)境下進(jìn)行,以保證細(xì)胞的活力和復(fù)蘇的成功率。